Investigação da atividade antitumoral do composto sintético LQB-223 em linhagens de câncer de mama

Abstract

Tumores de mama são heterogêneos e possuem diferentes evoluções clínicas. O tratamento do câncer de mama envolve diversas modalidades terapêuticas, sendo a quimioterapia composta pela doxorrubicina (DOX) e o docetaxel (DTX). Um grande obstáculo para o sucesso terapêutico é a resistência a múltiplas drogas. Adicionalmente, este tratamento pode causar toxicidade para as pacientes. Por esse motivo, a identificação de novos compostos que sejam capazes de sobrepujar os mecanismos de resistência e que gerem menor toxicidade associada ao tratamento do câncer de mama é de extrema relevância. Dessa forma, o composto 11a-N-Tosil-5-deoxi-pterocarpano, LQB-223, foi sintetizado e vem sendo testado pelo nosso grupo em modelos in vitro quanto a sua atividade antineoplásica. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos antitumorais do

LQB-223 em células de câncer de mama de diferentes subtipos. Para tal, as linhagens MCF- 7 (neoplásica, não invasiva e subtipo luminal), MDA-MB-231 (neoplásica, invasiva e subtipo

triplo-negativo) e HB4a (luminal, não neoplásica) foram utilizadas como modelo. A avaliação da viabilidade celular foi realizada pelos ensaios de MTT e clonogênico. Para detecção de apoptose, foi feita a marcação de Anexina V/PI por citometria de fluxo. A migração e motilidade celular foram avaliadas pelos ensaios de wound-healing e fagocitose de ouro coloidal, respectivamente. A expressão das proteínas foi mensurada por Western blotting. Para análise da toxicidade nas culturas 3D, o volume e a migração em gelatina foram aferidos e a viabilidade verificada pelo ensaio da fosfatase ácida. Nossos resultados mostram que o tratamento com LQB-223 inibiu a viabilidade e a formação de colônias nas células MCF-7 e MDA-MB-231, bem como resultou em aumento do número de células marcadas com anexina V/PI e diminuição de procaspases, sugerindo morte celular por apoptose. Além disso, um acúmulo de células na fase G2/M, mediante o tratamento com o LQB-223 foi observado, independentemente da modulação da expressão de p53 e p21. A sensibilidade das células MCF-7 e MDA-MB-231 ao LQB-223 foi associada à modulação na expressão do fator de transcrição oncogênico FOXM1 e das proteínas antiapoptóticas Survivina, XIAP, c-IAP1 e Mcl-1. De forma importante, o LQB-223 não reduziu a viabilidade de células não neoplásicas de mama, sugerindo um efeito preferencial deste composto para células tumorais. Diferentemente da exposição à DOX, o tratamento com LQB-223 resultou na redução da taxa migratória e motilidade celular de MCF-7 e MDA-MB-231. Em conformação 3D, o LQB-223 induziu a diminuição da viabilidade, volume e migração celular. Em conjunto, estes resultados revelam que o composto sintético LQB-223 promove efeitos citotóxicos em células neoplásicas de câncer de mama de diferentes subtipos tumorais em cultura 2D e 3D, além de modificar o seu perfil migratório. Ademais, o LQB-223 induz baixa toxicidade em células não neoplásicas de mama, apontando-o como um promissor composto de efeito preferencial para células tumorais de mama. Nossos dados in vitro encorajam a continuidade do estudo pré-clínico do LQB-223 para câncer de mama, no que tange à avaliação de seus efeitos antitumorais em modelos in vivo.