Padronização no uso do reagente TransFix™ + EDTA K3 em diagnóstico de leucemias agudas por imunofenotipagem

Abstract

A leucemia é definida como a proliferação ou expansão incontrolada de células hematopoéticas que não retêm a capacidade de se diferenciarem em células maduras. Uma das análises em amostras de medula óssea com suspeita de leucemia aguda é feito por citometria de fluxo. Visando manter a eficiência nas marcações imunofenotípicas nas amostras de medula com alguns dias após a coleta, foi necessário à busca de métodos que possibilitassem estabilizar essas amostras, permitindo assim uma análise posterior por citometria de fluxo. O reagente TransFixTM + EDTA K3 é uma solução de estabilização distribuída sob licença, pela Cytomark LTDA, que contém componentes ativos que estabilizam os antígenos celulares por um tempo maior que o convencional. Entretanto, existem raros estudos com este reagente em medula ossea, sendo mais utilizados em sangue total. Com base nisso, este estudo objetivou-se a padronizar o reagente TransFixTM + EDTA K3 em amostras de medula óssea. Para a padronização foram utilizadas quatro amostras de medula de pacientes não-leucêmicos nas concentrações de TransFixTM + EDTA K3 1/5, 1/10 e 1/20. Diferentes soluções de permeabilização, como o Tween ® 20, Kit BD Cytofix/CytopermTM e a Saponina foram utilizadas também em quatro amostras de medula de pacientes não-leucêmicos para avaliar a melhor permeabilização. Nossos resultados mostraram que as amostras com a concentração 1/10 obteve bons percentuais de marcação e foi escolhida para a segunda etapa deste experimento. Na concentração de TransFixTM + EDTA K3 1/10, as amostras mostraram que a sensibilidade e a intensidade de detecção dos antígenos intracelulares não foram alteradas e nem apresentaram diferenças de marcação, pelo método de permeabilização utilizando as diferentes soluções.