Expressão de CRLF2 associada ao status de NOTCH1/IKZF1 na leucemia linfoblástica aguda de células-T

Abstract

Introdução. Apesar das inúmeras alterações moleculares já terem sido identificadas na leucemia linfoblástica aguda de células-T (LLA-T), nos protocolos atuais, nenhuma delas é utilizada para a estratificação de risco destes pacientes. A superexpressão de CRLF2 foi recentemente detectada em 15% das LLAs-T, porém, até o momento, nenhum mecanismo molecular responsável por esta desregulação foi identificado. IKZF1 atua como repressor transcricional de CRLF2 e alguns estudos mostraram que, na LLA-T, a ativação da via NOTCH1 antagoniza o papel de supressor tumoral de IKZF1. A partir destas evidências, o objetivo principal deste estudo foi investigar a relação entre a perda de função de IKZF1, causada pela sua baixa expressão gênica ou pela ativação de NOTCH1 (mutações em NOTCH1/FBXW7), e a superexpressão de CRLF2 na LLA-T. Metodologia. Foram analisadas duas coortes independentes de pacientes pediátricos com LLA-T. As amostras do Programa de Hematologia-Oncologia Pediátrico formaram a coorte PHOP, e as do banco de dados Therapeutically Applicable Research to Generate Effective Treatments, a coorte TARGET. A caracterização molecular incluiu o rastreamento de: STIL-TAL1, TLX3 (RT-PCR) e mutações em NOTCH1/FBXW7 (PCR seguido de sequenciamento) na coorte PHOP, e por sequenciamento completo do exoma (WES) e sequenciamento do RNA (RNA-seq) na TARGET. Na coorte PHOP, as deleções em IKZF1 foram avaliadas por PCR-multiplex e os níveis transcricionais de ambos, IKZF1 e CRLF2, foram avaliados por RT-qPCR. Para a coorte TARGET, estas análises foram realizadas por WES e RNA-seq. Os testes estatísticos foram conduzidos no ambiente R Studio. Resultados. Nós identificamos CRLF2 superexpresso em 14% (8/57) e 16,3% (40/264) dos pacientes das coortes PHOP e TARGET, respectivamente. Na coorte TARGET observamos que a expressão de CRLF2 era maior nos subtipos imaturos de LLA-T do que em subtipos mais maduros (p < 0,05). Em ambas coortes, identificamos baixa frequência de alterações moleculares em IKZF1 (1,75% - PHOP e 4,17% - TARGET) e não foi observada correlação direta entre a expressão deste gene e de CRLF2. Contudo, categorizando os pacientes de acordo com o efeito da mutação na via NOTCH1, vimos que as que resultavam em estabilização da subunidade intracelular de NOTCH1 (ICN1) estavam associadas a maior expressão de CRLF2, com significância estatística na coorte TARGET (p = 0,04). Conclusão. IKZF1 (IK1) não está associado diretamente à expressão de CRLF2 na LLA-T. Entretanto, sabendo-se que a função de IKZF1 é antagonizada pela ativação da via NOTCH1 (aumento de ICN1), nós demonstramos pela primeira vez que a estabilização de ICN1 está associada à superexpressão de CRLF2 em pacientes pediátricos com LLA-T.