Padrão de Rearranjos Gênicos dos Receptores de Células T e B em Leucemias Imaturas: Leucemia Linfoide Aguda de Precursor Precoce de Células T, Leucemia de Fenótipo Misto T/ Mieloide e Leucemia Mieloide Aguda com Diferenciação Mínima

Abstract

Apesar do grande avanço na compreensão da biogênese das leucemias agudas (LA), ainda existem subgrupos que permanecem como verdadeiros desafios tanto diagnósticos quanto terapêuticos. Esses subtipos de LA, descritos como mais imaturos e mais raros, apresentam perfis imunofenotípicos com certo grau de sobreposição expressando uma significativa quantidade de marcadores comuns a linhagens celulares distintas. Essas entidades não apresentam alterações citogenéticas características conhecidas e tendem a se comportar de forma mais agressiva, com prognóstico incerto. Dentre esses subgrupos de LA, destacam-se a Leucemia Linfoide Aguda de Precursor Precoce de Célula T (ETP-ALL), a Leucemia Aguda de Fenótipo Misto T/ Mieloide (MPAL T/M) e a Leucemia Mieloide Aguda com Diferenciação Mínima (LMA M0). Recentemente, novas tecnologias revelaram a presença de uma certa sobreposição biológica entre essas entidades, com a identificação de alterações moleculares que parecem co-existir nesses três subgrupos. Com o objetivo de contribuir para melhor compreensão do panorama molecular dessas entidades clínicas e da estreita relação biológica entre elas, investigamos a presença de rearranjos nos genes dos receptores de células T e B nesses 3 subgrupos de LA, identificando os segmentos gênicos envolvidos nos rearranjos – V, (D) e J – e a composição da região juncional entre esses segmentos. Além disso, essa coorte também foi investigada quanto à presença de mutações do tipo FLT3-ITD. Neste estudo, foram analisadas amostras diagnósticas de medula óssea ou sangue periférico de 41 pacientes pediátricos, sendo 21 de ETP-ALL, 8 de MPAL T/M e 12 de LMA M0. Para análise dos rearranjos V(D)J, foram realizadas múltiplas PCR alelo-específicas, seguidas pela análise de heteroduplex dos produtos em gel de poliacrilamida e pelo sequenciamento direto das bandas monoclonais, primeiramente em um estudo-piloto com linhagens celulares para implementação da metodologia e, posteriormente, nas amostras-alvo do estudo. Rearranjos V(D)J foram identificados em 71,4% (15/21), 25% (2/8) e 25% (3/12) dos casos de ETP-ALL, MPAL T/M e LMA M0, respectivamente. Na ETP-ALL, foram encontrados 44 rearranjos monoclonais/bi-alélicos envolvendo os 4 loci gênicos estudados (TCRG, TCRD, TCRB e IGH). Sessenta e dois por cento dos pacientes com ETP-ALL apresentaram pelo menos um rearranjo envolvendo o locus TCRD, sendo este o locus mais comumente rearranjado. As LMA M0 apresentaram rearranjos nos loci TCRB e IGH, e as MPAL T/M, nos loci TCRG e IGH. O perfil molecular dos rearranjos TCR dos pacientes ETP-ALL revelou-se diferente daquele descrito na LLA-T, enquanto que pareceu ser semelhante entre os casos de MPAL T/M e LMA M0. FLT3-ITD foi encontrada em 19% dos casos de ETP-ALL, enquanto apenas 10% das LMA M0 abrigaram a mutação. Sendo assim, os resultados encontrados corroboram com a existência de concordâncias genômicas nos subtipos de LA avaliadas e sugerem que estudos moleculares possam contribuir para o entendimento da biogênese dessas entidades clínicas.