Relação entre deleções nos genes IKZF1 e BTG1 e a resistência ao tratamento com glicocorticoides em leucemia linfoblástica aguda

Abstract

A leucemia linfoblástica aguda de células precursoras B (LLA-B) é caracterizada pelo aumento da proliferação e pelo bloqueio da diferenciação de células imaturas da linhagem linfoide. Estudos demonstraram que alterações genéticas secundárias (por exemplo, deleções de IKZF1, CDKN2A e BTG1) afetam a regulação da especialização das células linfoides e da progressão no ciclo celular e estão fortemente relacionadas à resposta ao tratamento. Neste cenário, um estudo revelou que deleções em IKZF1 e BTG1 atuam sinergicamente e conferem pior prognóstico ao paciente com LLA-B. Este achado pode estar associado à resistência aos glicocorticoides, já que estudos in vitro identificaram aumento na viabilidade de linfócitos B de murinos que continham estas deleções quando tratados com esta classe de fármacos. Considerando o amplo uso de glicocorticóides no tratamento da LLA-B, é necessário elucidar quais mecanismos estão envolvidos no processo de resistência farmacológica. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a resposta in vitro ao tratamento com glicocorticoides mediante a inibição dos genes BTG1 e IKZF1. Para isso, estabelecemos as condições de transfecção para a inibição de BTG1 e/ou IKZF1 na linhagem celular 207 por meio de RNA de interferência e eletroporação utilizando o sistema Nucleofactor 4D. Em seguida, investigamos o efeito da supressão desses genes na viabilidade celular por meio do ensaio colorimétrico de MTT, bem como na expressão de genes responsivos a glicocorticoides (DUSP1, SGK1, FBXW7 e NR3C1), a qual foi quantificada por RT-qPCR. Após tratamento com 1 mM dexametasona por 24h, houve aumento na viabilidade das células transfectadas, indicando o estabelecimento de um fenótipo resistente quando mimetizamos as deleções em IKZF1, em concomitância ou não, com deleções em BTG1. Adicionalmente, observamos que a inibição exclusiva de BTG1 não é capaz de alterar a expressão dos genes da via de glicocorticoides nos estados pré e pós tratamento com dexametasona. Por outro lado, a inibição de IKZF1, resulta na diminuição da expressão de SGK1 (2,6x), FBXW7 (2,4x) e NR3C1 (1,7x), demonstrando seu papel em alterações na sinalização da via de resposta aos glicocorticoides. Com base em nossos resultados, sugerimos que deleções em IKZF1 resultam em prejuízos na atividade de elementos envolvidos na resposta a glicocorticoide. Como consequência, células que sofreram a inibição desse gene apresentam um fenótipo resistente a esses fármacos, o que pode justificar a maior incidência de recaídas em pacientes com LLA-B com esse genótipo.