Estudo funcional do DD3 no Câncer de Próstata e sua interação com a via do Receptor de Androgênio

Abstract

O gene DD3 corresponde a um RNA não codificante (ncRNA) específico da próstata. O seu papel como marcador diagnóstico no câncer de próstata (CaP) apresenta-se bem estabelecido, porém muito pouco se sabe até o presente momento sobre sua função na biologia deste tumor, bem como sobre seu envolvimento com a via do receptor de androgênio (AR). Este trabalho teve por objetivo caracterizar o papel funcional do ncRNA DD3 no CaP através da alteração de sua expressão na linhagem celular LNCaP, bem como avaliar seu envolvimento na via do AR. A função deste transcrito foi avaliada através da redução de sua expressão em células LNCaP utilizando RNAs de interferência específicos. Ensaios de viabilidade celular foram analisados por coloração com cristal violeta e azul de tripan e a avaliação da proporção de núcleos apoptóticos por marcação de núcleo com DAPI. Centrifugações fracionadas foram utlizadas para caracterizar as frações celulares em que o DD3 está localizado. As células LNCaP com DD3 silenciado apresentaram redução da viabilidade celular e aumento da proporção de núcleos picnóticos, indicativos de células em apoptose. O tratamento da LNCaP com o androgênio DHT aumentou significativamente a expressão do DD3, sendo esta ativação revertida pelo anti-androgênio flutamida, demonstrando que a indução da expressão do DD3 é mediada por esta via. A expressão de genes de resposta ao AR foi alterada quando a expressão do DD3 foi diminuída, indicando ser o DD3 um regulador da expressão destes genes. A tentativa de amplificar o transcrito completo do DD3 associada com predições de estruturas secundárias evidenciou que o DD3 pode ser processado em transcritos menores. Nossos dados indicam que este ncRNA é expresso majoritariamente no núcleo, em vesículas e ribossomos. Em conjunto, estes dados sugerem que o DD3 regula a expressão de genes envolvidos com a sobrevivência de células de CaP. Sugerem também, que após ser processado, deverá exercer funções relacionadas ao controle da expressão gênica, principalmente no núcleo e em vesículas. Sendo assim, o DD3 pode constituir-se em importante alvo

alternativo para o CaP, especialmente no CaP refratário contra tratamento anti- androgênico. Desta forma, os resultados gerados por este estudo dão base ao melhor entendimento das vias de sinalização ativadas pelo AR e de genes reguladores envolvidos nessa via, tal como o ncRNA DD3.