Avaliação funcional de variantes de BRCA1 localizados no domínio coiled-coil

Abstract

A maioria dos casos de câncer de mama pode ser atribuída a alterações em BRCA1, um gene crucial para a manutenção da integridade genômica. O sequenciamento desse gene ajuda, não apenas na identificação precoce de indivíduos com alto risco de desenvolvimento de câncer, mas também na orientação de indivíduos afetados quanto à adoção de rotinas preventivas. Entretanto, muitas das mutações identificadas em estudos genéticos não podem ser classificadas pois não apresentam uma designação clara da sua associação com a doença. Nesses casos, as mutações permanecem não classificadas. Ensaios funcionais podem ajudar a contornar esse problema. Esse trabalho busca avaliar funcionalmente variantes missense de BRCA1 na região coiled-coil, usando duas abordagens: a capacidade de ativação transcricional e a interação com PALB2. Um grupo inicial de variantes missense de BRCA1 (grupo 1, 7 variantes) foi selecionado a partir dos dados do Breast Cancer Information Core, todos de ocorrência natural na população e ainda não avaliados funcionalmente. Um segundo grupo de 14 variantes missense (grupo 2) foi selecionado após a realização de uma predição in silico, considerando os variantes naturais missense na região. A importância da posição para a interação com PALB2 e o risco elevado de associação com o câncer foram usados como critérios de inclusão. Os variantes foram gerados através de mutagênese sítio dirigida e os ensaios foram realizados em células HEK293FT. Os variantes do grupo 1 apresentaram níveis de ativação transcricional semelhantes aos observados para a proteína selvagem.. Entretanto, no ensaio de interação com PALB2, os variantes M1400V, A1416T apresentaram um perfil patogênico sugestivo. Considerando o grupo 2, o ensaio de ativação transcricional indicou um comportamento partogênicos para os variantes L1407F, L1407H, L1407I, L1407R, L1407V, M1411K, M1411R, M1411V, L1418F e L1418S. No ensaio de interação com PALB2, apenas os variantes L1407R, L1407V, M1411R, L1418S e L1418V demonstraram o mesmo perfil sugestivo. As duas abordagens usadas contribuem para a construção de um perfil de comportamento funcional para os variantes, no entanto, análises adicionais são necessárias para uma classificação final.