O papel de ASXL2 no câncer de mama

Abstract

Os Enhancers of Trithorax and Polycomb (ETPs) são proteínas capazes de regular efetores de modificações de histona e remodelamento de cromatina, o mecanismo epigenético menos estudado em câncer. Este mecanismo pode envolver diversas proteínas e modificações específicas, causando efeitos variados na expressão gênica, como ativação e silenciamento. Em câncer de mama (CM), o maior causador de mortes por câncer em mulheres no mundo, o papel dos ETPs é ainda menos explorado. O CM pode ser classificado em subtipos moleculares de acordo com a expressão de receptores de membrana para estrógeno, progesterona e HER2, originando, respectivamente, os subtipos Luminal A, Luminal B, e HER2. Na ausência destes receptores, classifica-se como subtipo Triplo Negativo (TN), mais agressivo e de pior prognóstico. Recentemente, a proteína ASXL2, de função ETP descrita em Drosophila, foi descrita como potencial reguladora da transcrição de genes alvo do receptor de estrógeno em CM, através de sua interação com modificadores de histona. A fim de avaliar o papel desta proteína no CM, realizamos uma análise inicial da expressão e localização de ASXL2 em linhagens celulares representativas dos subtipos moleculares da doença. Nos modelos MCF-7 e MDA-MB-231, que representam os subtipos Luminal A e TN, há maior expressão de ASXL2, que está localizado também no núcleo celular. Além disso, membros de famílias de modificadores de histona e remodeladores de cromatina tais como Polycomb, Trithorax, SWI/SNF e NURF, foram encontrados diferencialmente expressos e localizados nestas linhagens, e alguns deles, como YY1 e MLL, colocalizados com ASXL2. Para avaliar vias celulares e processos biológicos associados a esta proteína, realizamos seu silenciamento transiente nas linhagens Luminal A e TN, e a identificação dos perfis de expressão gênica global nos modelos silenciados comparados a seus controles mostrou mais de mil genes diferencialmente expressos (DE) em ambos os modelos. Análises in silico revelaram fatores de transcrição envolvidos com pluripotência como potenciais reguladores dos genes DE, bem como o enriquecimento de vias de sinalização como Wnt e TGF-beta,

associadas com proliferação e migração, dentre outros processos. Alguns dos genes DE foram validados por RT- qPCR, e ensaios funcionais apontaram que o silenciamento de ASXL2 tem impacto na migração celular e formação

de microvesículas no modelo TN, ambos processos associados com agressividade no câncer. Potenciais parceiros de ASXL2 foram identificados em ambos os modelos por imunoprecipitação seguida de análise proteômica, e incluem proteínas envolvidas em complexos de silenciamento e ativação da expressão gênica. Após experimento de imunoprecipitação de cromatina, ASXL2 foi encontrado associado a uma marca característica de silenciamento da cromatina (H3K27me3) no modelo Luminal A, indicando uma possível influência na regulação de expressão gênica via remodelamento de cromatina. Assim, de modo geral, observamos que ASXL2 pode ter um papel na regulação da expressão gênica no CM, podendo atuar em diversos níveis, através de sua associação com modificadores de histona e remodeladores de cromatina, bem como na regulação direta ou indireta de genes e vias de sinalização associados com câncer.