O papel do cofator transcricional IRF2BP2 no controle do ciclo e na Transformação celular in vitro e in vivo

Abstract

A proteína IRF2BP2 (Interferon regulatory factor 2 binding protein 2) é um dos membros da família de proteínas IRF2BP e foi descrita inicialmente como um corepressor transcricional dependente de IRF-2. O fator de transcrição IRF2 é conhecido por controlar a expressão de muitos genes responsivos ao interferon (IFN), que por sua vez atuam na regulação do ciclo celular e/ou apoptose. Embora o real envolvimento da proteína IRF2BP2 na transcrição desses genes ainda não tenha sido avaliado e seu papel fisiológico ainda seja pouco compreendido, dados recentes sugerem sua participação no controle de ciclo celular, apoptose e angiogênese, indicando que o desbalanço na função de IRF2BP2 poderia estar relacionada a fisiopatologia do câncer. Portanto, o objetivo principal desse estudo é investigar o papel de IRF2BP2 no controle de ciclo e transformação celular e determinar sua relevância no processo de tumorigênese. Para isso, células da linhagem de fibroblastos murinos NIH3T3 foram transduzidas com vetor retroviral contendo o gene IRF2BP2 sob controle de um promotor responsivo a doxiciclina/tetraciclina. Proliferação, ciclo, morte e transformação celular foram avaliados por marcação com cristal violeta, ensaio clonogênico, citometria de fluxo com marcação PI, BrdU e anexina V, PCR em tempo real, western blot, formação de focos, crescimento em meio semissólido e formação de tumores em camundongos nudes. Além disso, dados de RNA-Seq de amostras de fibroblastos humanos transformados foram obtidos do banco de dados GTEx (Genome-Tissue Expression) e analisados. Como resultados, observamos que a superexpressão de IRF2BP2 levou à redução da proliferação de células NIH3T3, associada a atraso na entrada na fase S do ciclo celular. Adicionalmente, a superexpressão de IRF2BP2 em células transformadas por H-rasV12 reduziu a formação de focos em cultura, colônias em meio semissólido e tumores em camundongos. A expressão de IRF2BP2 apresentou correlação inversa com a de diversos genes envolvidos na progressão do ciclo celular em fibroblastos humanos. Estes dados sugerem que IRF2BP2 possa ter um papel supressor tumoral, induzindo um menor potencial proliferativo através da regulação negativa do ciclo celular em células NIH3T3.