Caracterização do papel do cofator transcricional IRF2BP2 na homeostase e resposta de linfócitos T

Abstract

Os mecanismos de ativação e diferenciação de células T CD4 constituem uma complexa rede de sinalização, envolvendo diversas proteínas reguladoras. IRF2BP2 (Interferon Regulatory Factor-2 Binding Protein-2) foi descrito como um repressor transcricional envolvido na regulação da expressão gênica em diferentes contextos biológicos. Recentemente, nosso laboratório demonstrou que a expressão ectópica de IRF2BP2 em linfócitos T CD4 leva a uma diminuição da proliferação celular e uma diminuição da expressão dos marcadores de ativação CD25 e CD69 após a estimulação via TCR. Com o objetivo de compreender o papel do IRF2BP2 na homeostase e na resposta dos linfócitos T CD4 in vivo, foram gerados animais transgênicos condicionais para superexpressão de IRF2BP2 em linfócitos T (IRF2BP2fl/flLck-cre+

). Para avaliar o envolvimento da superexpressão de IRF2BP2 na homeostase de células T, realizamos uma caracterização das populações linfócitárias no timo, baço e linfonodos periféricos em animais IRF2BP2fl/flLck-cre+ naive, analisando as populações de células CD3+ , B220+ , CD4+ , CD8+ ,

CD4+CD25+ Foxp3+ , CD8+CD44+CD122+

, CD62LhighCD44-

, CD62LhighCD44+ e

CD62LlowCD44+

. Observamos que os animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

apresentaram uma redução no número total de linfócitos e no seu percentual relativo de células T no baço e linfonodos quando comparado aos animais IRF2BP2fl/flLck-cre-

. Também

observamos um aumento na população de células CD4+CD25+ Foxp3+ no baço e nos

linfonodos dos animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

. Os animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

apresentam um aumento na população de células CD8+CD44+CD122+

, quando

comparado aos animais IRF2BP2fl/flLck-cre-

. Observamos também uma diminuição

da população de células CD62LhighCD44-

e um aumento das populações de células

CD62LhighCD44+ e CD62LlowCD44+

. Analisamos também a população linfocitária em

animais sensibilizados. Os animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

e selvagens foram sensibilizados na pata traseira por via subcutânea com ovalbumina (OVA) na presença de adjuvante completo de Freund. Os animais IRF2BP2fl/flLck-cre+ sensibilizados com OVA apresentaram uma redução no número total de células nos linfonodos drenantes e também foi observado uma redução no compartimento CD3+ dos animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

, quando comparado aos controles selvagens. Também observamos uma resposta proliferativa diminuída de células T CD4+ dos

animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

após estimulação in vitro com OVA, quando comparado

a células T CD4+

dos animais IRF2BP2fl/flLck-cre-

. Para avaliar o efeito do IRF2BP2 na diferenciação de células T CD4, utilizamos as culturas de células diferenciadas in vitro para Th1, Th2 e Th17. Com relação às citocinas produzidas por cada perfil efetor, podemos observar um aumento na produção de IFN- nos diferentes perfis efetores nos animais IRF2BP2fl/flLck-cre+

. Em conjunto, nossos resultados indicam que a superexpressão de IRF2BP2 leva a uma redução no compartimento de linfócitos T em animais naive, o que sugere uma ruptura na homeostase dessas células. Além disso, a superexpressão de IRF2BP2 leva a uma redução na proliferação celular em resposta à estimulação TCR e a uma diferenciação preferencial ao perfil Th1, com o aumento da produção de IFN-γ, indicando um papel para IRF2BP2 na resposta efetora de células T.