Avaliação de glicobiomarcadores em células tronco tumorais de câncer colorretal

Abstract

O câncer colorretal (CCR) apresenta alta taxa de mortalidade, resultado dos processos de metástase e recorrência da doença. Acredita-se que as células tronco tumorais (CTTs) são cruciais para ambos os processos, pois asseguram a manutenção da massa tumoral, além de serem intrinsecamente resistentes às terapias convencionais. Embora diversos trabalhos venham tentando caracterizar as CTTs, aqueles que se dedicam a avaliar o papel de glicanos (carboidratos covalentemente ligados a proteínas ou lipídios) na identificação dessa população e na manutenção do fenótipo tronco ainda são relativamente poucos. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar e caracterizar glicobiomarcadores em subpopulações de células tronco tumorais de câncer colorretal. Para isso, inicialmente foi padronizado um protocolo de formação de esferas para as linhagens Caco-2 e HT-29. Após o crescimento das esferas, foram monitoradas variações na expressão de cinco conhecidos marcadores de CTTs (CD24, CD44, ALDH1, LGR5 e PROM1). Em comparação ao que se observa na condição parental (2D), em Caco-2 foi vista uma redução da expressão de CD24, enquanto em HT-29 foi observado um aumento dos níveis de expressão de ALDH1, LGR5 e PROM1. Com relação aos glicogenes (genes relevantes para a glicosilação), oito destes tiveram seus níveis de expressão monitorados (ST3GAL1, OGT, OGA, MGAT5, GFAT1, GFAT2, B4GALT1 e B3GNT2), tendo sido observado aumento de B3GNT2, OGT e OGA na condição de esferas em HT-29. Já em Caco-2, amplas variações experimentais impossibilitaram qualquer conclusão no que tange a mudanças na expressão de glicogenes. Análises de correlação in silico (marcadores de CTTs versus glicogenes), utilizando amostras de carcinoma de cólon e reto provenientes do The Cancer Genome Atlas Program, mostraram uma correlação positiva entre a expressão de CD44xOGA, CD44xB3GNT2 e LGR5xOGA para carcinomas de cólon e CD44xOGA, LGR5xOGA, CD44xOGT e CD24xB3GNT2 para carcinomas de reto. Também foi observado aumento na expressão de LGR5, CD44, MGAT5, OGA, OGT e ST3GAL1 e diminuição de CD24, ALDH1 e B4GALT1 em amostras de carcinoma de cólon quando comparadas ao tecido normal adjacente, bem como aumento na expressão de LGR5, CD44, PROM1 e OGT e redução de ALDH1, B3GNT2 e ST3GAL1 em amostras de carcinoma de reto quando comparadas com amostras de tecido normal adjacente. Surpreendentemente, nenhum dos marcadores de CTTs foi capaz de predizer a sobrevida livre de doença (SLD) ou a sobrevida global (SG) de pacientes com CCR, no entanto, pacientes com carcinoma de cólon que apresentaram maior expressão de MGAT5 tiveram menor SLD. Além disso, a maior expressão de OGA também resultou em menor SG de pacientes com câncer de cólon. Portanto, nossos dados sugerem que os níveis de expressão OGA, além de correlacionarem-se com os de marcadores de CTTs, impactam diretamente na sobrevida de pacientes com carcinoma de cólon, fornecendo indícios de uma possível função dessa enzima em mecanismos de manutenção do fenótipo tronco.