Caracterização do perfil de expressão e do papel funcional da osteonpontina-C na leucemia linfoblástica aguda de células B

Abstract

A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é o câncer mais comumente diagnosticado na infância, sendo as originadas de células B, as mais frequentes (LLA-B). A presença de rearranjos gênicos está associada à estratificação de risco e prognóstico da doença. Pacientes positivos para a fusão gênica KMT2A-AFF1 são incluídos no subgrupo de pior prognóstico, com elevado risco de recaída e acometimento do sistema nervoso central (SNC). Dentre os produtos gênicos de expressão alterada nas LLAs, está osteopontina (OPN). A OPN é uma glicofosfoproteína de matriz extracellular envolvida em diversas etapas da progressão tumoral. O transcrito primário da OPN apresenta splicing alternativo gerando três isoformas, denominadas OPNa, OPNb e OPNc. Essas isoformas apresentam um perfil de expressão e papéis tecido-tumores específicos. Na LLA, já foi demonstrado que a OPN total, ou seja, a soma de todas as isoformas da OPN oriundas de modificações pós transcricionais e traducionais, suporta a dormência das células e sua sobrevivência em resposta ao tratamento com quimioterápicos. Entretanto, os papéis das isoformas da OPN na LLA-B ainda não foram elucidados. Sendo assim, nosso estudo buscou investigar o perfil de expressão transcricional e os papéis das isoformas da OPN na LLA-B KMT2A-AFF1. Desta forma, analisamos amostras de pacientes LLA-B disponíveis no banco de dados TARGET e observamos que a maioria expressava as três isoformas da OPN. Para confirmar esse resultado, analisamos amostras do INCA de pacientes LLA-B positivos para KMT2A-AFF1 (n=26) ou ETV6-RUNX1 (n=28, grupo comparativo). Os níveis de expressão transcricional das isoformas da OPN foram analisados por RT-qPCR. Demonstramos que a OPNc foi a isoforma superexpressa no subgrupo KMT2A-AFF1 e que está associada à características desfavoráveis da doença. Para investigar o papel da OPNc na LLA-B KMT2A-AFF1, escolhemos a linhagem celular RS4;11. As células RS4;11 foram transfectadas com oligômeros de DNA anti-senso anti-OPNc ou sua respectiva sequencia controle scramble, utilizando o sistema Nucleofector 4D. A eficiência do silenciamento foi avaliada por RT-qPCR e imunofluorescência. Observamos que mediante o silenciamento da OPNc as células aumentaram sua proliferação, porém diminuiram sua viabilidade, capacidade adesiva, migratória e invasiva. Com base nesses resultados, nossa hipótese é que a OPNc pode controlar a habilidade das células leucêmicas em invadirem o SNC, contribuindo para um fenótipo mais agressivo na LLA-B.