Identificação de alterações moleculares em FBXL7 e seu impacto nos carcinomas epidermoides de esôfago e cabeça e pescoço

Abstract

O carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP) compreende ~90% dos cânceres de cabeça e pescoço e afeta diferentes localizações anatômicas, dentre elas cavidade oral, orofaringe e laringe (CECO, CEOF, CEL). Com exceção dos CEOF associados à infecção pelo papilomavírus humano (HPV), os principais fatores de risco no CECP são o álcool e tabaco. A sobrevida global de pacientes acometidos por CECP é de cerca de 50% em cinco anos, porém uma proporção significativa desenvolve um segundo tumor primário (STP). Pacientes com CECP têm como um dos principais sítios acometidos por STP o esôfago, o que diminui sua sobrevida para menos de 20%. O carcinoma epidermoide de esôfago (CEE) corresponde a até 88% dos casos e tem o álcool e tabaco como principais fatores de risco. A exposição concomitante dos epitélios da cabeça e pescoço e esôfago ao etanol e à fumaça do cigarro pode criar um campo de cancerização favorecendo o aparecimento de tumores sincrônicos ou metacrônicos. Baseado nisto, nosso grupo vem buscando biomarcadores moleculares que possam auxiliar na compreensão do desenvolvimento do campo de cancerização no trato aerodigestivo superior e no diagnóstico diferencial dos tumores associados. Inicialmente, foi realizado um microarranjo de metilação utilizando a plataforma Infinium 450K, em que o perfil de metilação de FBXL7 foi capaz de distinguir os tumores e o tecido adjacente não tumoral de pacientes com CEE com 100% de sensibilidade e especificidade. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações moleculares de FBXL7 e suas possíveis consequências em CEE e CECP. Inicialmente, as análises de microarranjo de metilação foram estendidas para um número maior de amostras de CEE. Identificamos uma sonda hipometilada localizada no corpo de FBXL7, cg11339964, nos tumores, com alto potencial de discriminação em relação ao tecido adjacente. Estabelecemos pontos de corte em sets de treino para o CEE e CEL, resultando em sensibilidade: 73,08%, especificidade: 94,12% e acurácia: 85,0% e sensibilidade: 83,33%, especificidade: 87,18%, e acurácia: 85,19%, respectivamente. A sonda cg11339964 estava hipometilada em diversos tumores associados ao álcool e tabaco e sem alterações nos tumores associados ao HPV como câncer cervical. Não encontramos

correlação entre a metilação em cg11339964 e a expressão da isoforma principal de FBXL7. Por imuno- histoquímica, a expressão de FBXL7 não mostrou correlação com os níveis de AUKA e BIRC5, seus

alvos proteicos de degradação, no CEE e CECP. A região genômica da sonda cg11339964 engloba ainda um retrovírus endógeno, MER4A1, e uma região de enhancer. Porém, não foram observadas diferenças de expressão entre adjacente e tumor ou correlação da metilação em cg11339964 com a expressão de MER4A1 em CEE e CEL. Análises de correlação dos níveis de metilação de cg11339964 com a expressão de todos os genes humanos no CEL identificaram TYK2, superexpresso em CEE, como provável alvo do enhancer. Este foi o primeiro estudo identificando as alterações moleculares de FBXL7 em CEE e CECP. Os altos valores discriminatórios em tumores associados ao álcool e tabaco apontam a hipometilação em cg11339964 como potencial biomarcador de transformação do tecido associado à carcinogênese química.