Alterações moleculares em grupos especiais de leucemias mieloides agudas pediátricas

Abstract

Introdução. Os eventos genéticos mais frequentes associados com o desenvolvimento das leucemias mieloides agudas pediátricas (LMA-p) incluem as alterações tipo I (nos genes FLT3, KIT, NRAS, KRAS e PTPN11) e tipo II (RUNX1-RUNX1T1, CBF-MYH11, PML-RAR e rearranjos do KMT2A [KMT2A-r]). Entretanto, alterações genéticas raras (<5% dos casos), representadas pelas fusões gênicas DEK-NUP214, MYST3-CREBBP, RBM15-MKL1, CBFA2T3-GLIS2 e os rearranjos do gene NUP98 (NUP98-r), demandam investigação em série de casos para caracterização da frequência e associação clínica dessas anormalidades. Nossos objetivos foram caracterizar as LMA-p de acordo com as alterações moleculares e testar as associações de risco com a sobrevida global; descrever o perfil genômico do subtipo PML-RAR e as variantes germinativas possivelmente envolvidas na leucemogênese. Material e métodos. Foi analisada uma coorte de 788 casos de LMA-p (de novo) com idade <19 anos (2000-2017). As regiões gênicas hotspots de mutações em genes da via de sinalização MAPK (FLT3, NRAS, KRAS, PTPN11 e KIT) foram analisadas por PCR/sequenciamento de Sanger. As fusões gênicas associadas à LMA (KMT2A-r, RUNX1-RUNX1T1, CBFβ-MYH11, PML-RARα, NUP98-r, CBFA2T3-GLIS2, MYST3- CREBBP e RBM15-MKL1) foram identificadas por RT-PCR/FISH. As análises estatísticas foram realizadas com os testes de qui-quadrado, exato de Fisher e Mann-Whitney U. As probabilidades de sobrevida global (pSG) em 5 anos foram comparadas usando o teste de log-rank e curvas de Kaplan-Meier. Os pacientes foram tratados segundo as diretrizes do protocolo BFM-AML2004, não incluídos em estudos clínicos. Foi realizado o sequenciamento do exoma nas amostras de DNA de um paciente com PML-RARα e de seu irmão gemelar sem doença. Resultados. As alterações tipo I e II foram identificadas em 55% e 46,4% dos casos, respectivamente. A frequência das mutações tipo I foi maior nas faixas etárias superiores (12,6% nos casos com idade ≤2 anos, 39,5% nos casos entre 2-10 anos e 47,9% nos casos ≥11 anos de idade). CBFβ-MYH11 conferiu maior pSG que os casos sem essa alteração (71,5±10,9% e 30,9±3,5%, respectivamente). Por outro lado, casos apresentando mutações em PTPN11 apresentaram pSG mais baixa que os casos sem essas mutações (13,0±8,4% e 33,7±4,2%, respectivamente). NUP98-r foram identificados em 2,8% da coorte e nenhum dos casos analisados apresentou DEK-NUP214. Entre os pacientes com idade ≤2 anos, as alterações MYST3-CREBBP, RBM15-MKL1, NUP98-r e CBFA2T3-GLIS2 foram identificadas em 1,7%, 1,1%, 3,9% e 0,6%, respectivamente. Na análise pareada dos exomas da amostra tumoral do paciente com PML-RARα e a amostra do seu irmão sem doença, foram identificadas 5911 variantes, sendo 75,5% representadas por SNVs (variações de nucleotídeo único). Vinte porcento das variantes apresentaram impacto deletério para a proteína. Na análise sítio-dirigida para 116 genes associados a predisposição genética ou a etiopatogênese das LMAs, 46 genes apresentaram variantes nas amostras sequenciadas. Conclusões. A caracterização dos subgrupos genéticos de LMA contribui para a identificação de marcadores moleculares de valor preditivo de sobrevida. Uma análise exploratória do sequenciamento do exoma precisa ser realizada para a identificação de eventos leucemogênicos.