Papel do domínio de transativação C-terminal na apoptose induzida por NFAT1 e o potencial uso do CA-NFAT1 na terapia gênica contra o câncer

Abstract

A família do fator nuclear de células T ativadas (NFAT) é composta por quatro membros regulados por influxo de cálcio. Embora, os fatores de transcrição NFAT apresentem algumas sobreposições de função na regulação gênica, vários estudos têm mostrado papéis distintos para as proteínas NFAT na regulação da morte celular. O domínio de transativação C-terminal (TAD-C) é a região que apresenta a menor similaridade de sequência entre as proteínas NFAT. O TAD-C é essencial para interação entre o NFAT1 e diferentes proteínas, no entanto, sua contribuição para indução de morte celular pelo fator NFAT1 é pouco conhecida. Recentemente, foi

demonstrado também que o NFAT1 pode cooperar com a via oncogênica de Ras-Raf- MEK-ERK para induzir apoptose. Portanto, temos como objetivos avaliar quais regiões

do TAD-C do NFAT1 são necessárias para indução de apoptose e se a forma constitutivamente ativa do NFAT1 (CA-NFAT1) pode ser utilizada como terapia gênica para indução de morte celular em tumores. Aqui, nós descrevemos pelo menos duas regiões do TAD-C do NFAT1, que conferem atividade proapoptótica ao NFAT1. Além disso, mostramos que quando fundido ao TAD-C do NFAT1, o fator NFAT2, que está associado à transformação celular, induz a apoptose em fibroblastos. Em seguida, observamos que os fibroblastos transformados com H-RasV12 sofreram apoptose de forma intensa mediante tratamento com adenovírus carreando o gene CA-NFAT1 (AdCANFAT1). No entanto, não foi possível observar morte celular na maioria das células tumorais testadas mediante transdução com AdCANFAT1. Apenas as culturas das linhagens tumorais de cólon testadas sofreram apoptose moderada quando tratadas com AdCANFAT1. Além disso, observamos que o tratamento com AdCANFAT1 levou a um massivo aumento da expressão de TNF em todas as linhagens avaliadas. Portanto, estes resultados sugerem que as linhagens de cólon testadas são susceptíveis a apoptose induzida por NFAT1, entretanto, mais estudos são necessários para compreender os aspectos moleculares que tornam, somente, essas linhagens celulares susceptíveis a morte celular induzida por CA-NFAT1.