Perfil de expressão de isoformas de SPLICING da osteopontina e do PTEN em linhagens celulares de endométrio

Abstract

O carcinoma endometrial (CE) é classificado nos subtipos I (endometrióide) e II (não endometrióide). Vários produtos gênicos foram estudados neste tumor, incluindo osteopontina (OPN) e o PTEN. Entretanto, os perfis de expressão de variantes de splicing da OPN (OPN-SI) e do PTEN (PTEN-SI), não foram investigados. As OPN-SI mais estudadas são as OPNa, OPNb e OPNc. As PTEN-SI são denominadas VS-FL (variante completa), VS-3a, VS-3b, VS-3c, VS-5a, VS-5b, VS-5c, VS-5d e VS-DelE6. Este estudo objetivou caracterizar o padrão de expressão das OPN-SI e das PTEN-SI em linhagens celulares de endométrio, relacionar essa expressão com o grau e tipo histopatológico das linhagens tumorais investigadas, avaliar a expressão diferencial entre as linhagens tumorais e não tumorais de endométrio e analisar seus perfis de expressão em resposta ao tratamento com derivados de extratos de tomates. O RNA total foi extraído das linhagens celulares endometriais E6/E7/TERT e EM42 (não tumorais) e Ishikawa, RL95-2, AN3CA e KLE (tumorais), seguido da síntese de cDNA. A expressão transcricional, protéica e a viabilidade celular foram investigadas por qRT-PCR, imunoblot e ensaio de viabilidade por 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5- difeniltetrazólio (MTT). Demonstramos que todos transcritos das OPN-SI são expressos em todas as linhagens celulares, exceto na EM42, sendo o transcrito codificante da OPNa a isoforma expressa em níveis mais elavados. As três OPN-SI são expressas em níveis mais elevados em linhagens representativas de graus histopatológicos mais diferenciados. Em relação ao PTEN, as linhagens expressaram todas as PTEN-SI testadas, sendo a VS-FL a de maior nível de expressão, seguida das VS-DelE6 e VS-3b. Em nível proteíco, a OPN total é expressa em todas as linhagens e a PTEN completa somente em linhagens não tumorais. A pAKT exibiu um padrão de expressão oposto. O tratamento da KLE com preparações distintas de tomate contendo licopeno, diminuiu a viabilidade celular. Os níveis de expressão das variantes PTEN-FL, VS-DelE6 e VS-3b mostraram-se maiores na linhagem tumoral tratada com o agente citotóxico em relação ao controle. Em nível protéico, a AKT mostrou-se expressa, de forma similar, na linhagem tumoral tratada com o extrato que contém licopeno, bem como na não tratada. No entanto, a pAKT exibiu menor expressão na linhagem tumoral tratada e a expressão da PTEN completa não foi detectada. Padrões de expressão diferenciais foram observados em algumas dessas isoformas entre células tumorais que representam diferentes graus e subtipos de tumor. O tratamento com extratos contendo licopeno, promoveram diminuição da viabilidade celular, aumento na expressão de isoformas específicas do PTEN e diminuição da expressão de pAKT. Em conjunto, nossos dados indicam que as OPN-SI e do PTEN-SI estudadas são expressas nas linhagens tumorais e não tumorais do endométrio. As OPN-SI e a VS-5c apresentam expressão diferencial nas linhagens celulares representativas dos tumores de endométrio do Tipo II e na linhagem celular não tumoral, respectivamente, indicando papel oposto entre elas. O tratamento com extratos contendo licopeno diminuem a viabilidade celular, aumentam a expressão de PTEN-SI e inibem a fosforilação de AKT, sugerindo que estas variantes, em especial a DelE6 possam atuar na sobrevivência de células de CE. Nossos achados contribuem no conhecimento da biologia dos tumores de endométrio.