Investigação de mecanismos envolvidos com o desenvolvimento de tumores de Wilms

Abstract

Introdução: Identificar novas alterações moleculares em tumores de Wilms (TWs) é importante não somente para uma melhor compreensão da biologia tumoral, mas para auxiliar na descoberta de novos possíveis biomarcadores, com o intuito de melhorar a estratificação de risco e o tratamento dos pacientes, o que é um grande desafio atualmente. Alterações na via ribossomal, identificada alterada em uma análise prévia de RNA-Seq do grupo e nos genes RPL5 e RPL11, que a compõem; bem como alterações metabólicas a nível global ainda são pouco exploradas em TW. Objetivo: Avaliar possíveis alterações moleculares nos genes RPL5 e RPL11 e alterações metabólicas em TW e seu papel no desenvolvimento e progressão tumoral. Casuística e Métodos: A partir de dados prévios de RNA-Seq de amostras pareadas de tecido do córtex renal normal (RN), do componente blastematoso do tumor primário (TW) e de metástases pulmonares (MET), foi identificada a via ribossomal alterada tanto no TW quanto na MET. Selecionamos os genes diferencialmente expressos RPL5 e RPL11 como alvos do estudo, buscando avaliar alterações moleculares nesses genes, através de experimentos em amostras de RN e TW congeladas e armazenadas no Banco Nacional de tumores do INCA (BNT-INCA). Avaliamos a presença de mutações, o perfil de metilação e a expressão diferencial de miRNAs por análises in silico. Ainda, foram realizadas análises de expressão gênica e de miRNAs selecionados por RT-PCRq e a avaliação da expressão proteica por western blotting. Foi realizada a análise do perfil metabolômico de amostras pareadas de TW e RN por cromatografia liquida acoplada à espectrometria de massas. Por fim, os dados foram associados entre si e às características clínico-patológicas dos pacientes. Resultados: Não foram identificadas mutações nem alterações de metilação em ambos os genes. As alterações metabólicas não foram associadas à via ribossomal. Os miRNAs avaliados que têm esses genes como alvos não apresentaram associação aos demais mecanismos avaliados. A expressão de RPL5 foi associada à classificação de risco (predomínio de blastema), no entanto, essas alterações não impactam a expressão proteica. Para RPL11, observamos uma diferença de expressão entre TW e RN nas amostras de avaliadas por RT-PCRq. Também foi observada uma diferença significativa de expressão proteica, no entanto, em níveis opostos. Com relação à metabolômica, foram identificadas alterações significativas entre TW e RN, e ainda, o perfil metabolômico apresentou o potencial de classificar, de forma indepente, as amostras de acordo com a classificação de risco dos pacientes. Conclusão: De forma geral, assumimos que a via ribossomal, especificamente os genes RPL5 e RPL11, não têm papel relevante no desenvolvimento do TW. Por outro lado, alterações metabólicas podem não apenas estar associadas ao desenvolvimento do tumor, mas serem potenciais biomarcadores a serem explorados com utilidade clinica para pacientes com TW.