Estudo da contribuição da calpaína 10 na agressividade do câncer de mama

Abstract

O câncer de mama (CM) é o mais frequente entre as mulheres e possui alta taxa de mortalidade, sendo estratificado nos subtipos moleculares LuminalA, LuminalB, HER2+

e Triplo-Negativo (TN). Esta doença apresenta uma alta heterogeneidade, e a compreensão molecular da mesma se faz necessária. Para tal, um estudo proteômico conduzido por nosso grupo identificou altos níveis de expressão de calpaína 10 (CAN10) no plasma sanguíneo de pacientes HER2-, sendo tal expressão também observada nas linhagens celulares MDA-MB-231 (TN) e HCC-1954 (HER2+ ). Calpaínas são endoproteases capazes de clivar diversos substratos, sendo as calpaínas 1 e 2 (CAN1 e CAN2) as majoritariamente estudadas. Assim, pouco é sabido acerca da função da CAN10 em geral e principalmente no CM. Desta forma, o presente estudo visou identificar a contribuição da CAN10 na agressividade desta doença. Para isto, foi realizado o silenciamento transiente desta proteína nos modelos in vitro que a superexpressam (HCC1954si e MDA-MB-231si). Os perfis de expressão gênica global das linhagens silenciadas e seus respectivos controles foram identificados, através do ensaio de microarranjo, e comparados, evidenciando diversos genes diferencialmente expressos (DE) em cada modelo silenciado. Análises in silico permitiram verificar que não há grande sobreposição dos genes DE, demonstrando que a CAN10 possui alvos diferentes entre os modelos. A identificação in silico de vias de sinalização, interações e potenciais reguladores dos genes DE de cada modelo silenciado foi realizada através do software Metacore®. Estas análises evidenciaram que, apesar da possível ativação de diferentes vias de sinalização, os processos de transição epitélio-mesênquimal, ativação de proliferação e inibição de apoptose estão relacionados com CAN10 no CM. Desta forma, validamos, através da quantificação por PCR quantitativo em tempo real, alguns membros de vias envolvidas com estes processos, bem como os níveis transcricionais das CAPN1 e CAPN2, após evidências sugerirem que as calpaínas podem interagir entre elas. A fim de correlacionar a expressão/atividade de CAN10 e o perfil de expressão global obtido com microarranjo, foi realizada uma análise in

sílico dos possíveis reguladores destes transcritos DE. Nossos resultados apontaram os fatores de transcrição NF- κB, c-Jun (AP1), c-Fos e c-Myc, como os mais representativos. Além destes achados, identificamos alterações

significativamente representativas na expressão de genes relacionados com a regulação epigenética, como RNAs longos não codificantes (lncRNAs) e microRNAS (miRNAs). A análise in silico das vias de sinalização dos miRNAs encontrados DE nas linhagens HCC1954si e MDA-MB-231si identificou vias relacionadas com a agressividade tumoral do CM, ratificando a relação da CAN10 com fenótipos agressivos de CM. A regulação destes miRNAs DE também se dá, com grande representatividade, pelos fatores de transcrição NFκB e c-Myc, por análise in silico. Em conclusão, sugerimos que a CAN10 pode contribuir com a agressividade do CM, e, esta contribuição possívelmente está relacionada com a regulação da expressão gênica.